簡(jiǎn) 介:目前3’-RACE方法主要基于mRNA 3端polyA尾巴這一特點(diǎn),采用OligodT-接頭方法進(jìn)行逆轉錄實(shí)驗,然后采用PCR方法獲取3端序列。
技術(shù)優(yōu)勢:
(1) 3’-RACE技術(shù)優(yōu)化:本實(shí)驗采用高效逆轉錄增強劑以及耐高溫的RTase進(jìn)行逆轉錄,同時(shí)加以改進(jìn)避免單引物擴增造成的實(shí)驗障礙,能夠快速、準確獲取3端序列;
(2) 原核基因3’-RACE優(yōu)化:通過(guò)對原核生物mRNA高效修飾,實(shí)現該3-UTR的完整獲取。
客戶(hù)須知:
3’-RACE服務(wù)項目 |
周期 |
最終提供客戶(hù)資料 |
原核基因3’-RACE |
14-20個(gè)工作日 |
詳細實(shí)驗報告,原始測序結果,菌液等 |
真核基因3’-RACE |
14-20個(gè)工作日 |
詳細實(shí)驗報告,原始測序結果,菌液等 |
LncRNA 3’-RACE |
14-20個(gè)工作日 |
詳細實(shí)驗報告,原始測序結果,菌液等 |
案例:
圖:使用本公司3’-RACE方法獲取了不同基因的3’-RACE PCR電泳結果(A1: 大腸桿菌某基因1600 bp,B1: 牡蠣某基因 1800 bp;C1:小鼠某lncRNA 460 bp;銀鯧某基因D1: 2600 bp)
客戶(hù)提供:
樣品類(lèi)型 |
組織樣本 |
細胞樣品 |
樣品需要量 |
≥80-100 mg 注:對于RNA含量較少的樣本,請提供更多的樣本 |
≥1-10×106個(gè)(相當于六孔板長(cháng)滿(mǎn)后的一個(gè)孔細胞量) |
取樣和保存環(huán)境 |
快速取出樣本→放入凍存管→液氮速凍5min→轉移-80℃長(cháng)期保存。 |
貼壁細胞: 棄去培養基→加入500 ul TRIzol→室溫裂解3 min→移液器取出放入1.5 ml離心管→4℃保存一周。 懸浮細胞: 取出培養基→放入15 ml離心管→離心(1000 rpm,5 min,室溫)→棄去上清→加入500 ul TRIzo→室溫裂解3 min→移液器取出放入1.5 ml離心管→4℃保存一周 |
運輸 |
杭州市內干冰上門(mén)取樣; 外地客戶(hù)干冰快遞運輸; 組織保存液,冰袋運輸 |
杭州市內干冰上門(mén)取樣; 外地客戶(hù)干冰快遞運輸; 加入500 ul TRIzol,冰袋運輸
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*(經(jīng)本公司評估后,實(shí)驗沒(méi)有結果,不收取任何費用)